Schöneborn, Holger

Selbstreplizierende Oligonucleotide : zum Einfluss der Matrizenlänge bei kinetischen Untersuchungen auf der Basis des Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfers

Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein neues Verfahren zur Verfolgung von Selbstreplikationsexperimenten auf Oligonucleotidbasis entwickelt, welches auf Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) basiert. Dieser erlaubt nach erfolgter Kalibrierung die Quantifizierung der Umsatzraten in Abhängigkeit von der Zeit. Des Weiteren benötigte thermodynamische Daten der Ligationsprodukte wurden durch unabhängig gemessene Schmelzkurven ermittelt. Das Verfahren ermöglicht die direkte Beobachtung des Fortgangs der Replikation innerhalb der als Reaktionsgefäß dienenden Küvette, womit im Vergleich zu früher durchgeführten Experimenten dieser Art die Zahl der Datenpunkte stark vergrößert werden konnte. Darüber hinaus zeichnet sich die Methode durch eine hohe Genauigkeit und Reproduzierbarkeit sowie eine unproblematische und zeitsparende Durchführung aus. Mit der entwickelten Methode konnte der Einfluss einer systematischen Sequenzverlängerung auf die Oligonucleotidreplikation untersucht werden.