Lucke, Susann

Reduktion der Vektormobilisierung durch RRE-defiziente lentivirale Vektoren

HIV-basierende Vektoren bergen das Risiko der Vektormobilisierung durch HIV. Die Infektion lentiviral transduzierter Zellen mit HIV kann zur Verpackung der Vektor-RNA in HIV-Partikel und zum Vektortransfer führen. Die ungespleißte RNA wird in einem Rev-RRE-abhängigen Weg ins Zytoplasma transportiert. Die RRE-Deletion sollte das Mobilisierungsrisiko reduzieren. Das RRE wurde gegen einen MS2 stem loop, eine RNA-Sekundärstruktur, an die das Hüllprotein des Phagen MS2 binden kann, ausgetauscht. Die Kotransfektion des RRE-defizienten, MS2-tragenden Vektors mit einem MS2-Rev-Expressionsplasmid ermöglichte Vektortiter über 5x10⁵ IU/ml. Die Infektion transduzierter Zellen mit HIV-1 und transiente Transfektion von Verpackungsplasmiden führte nicht zu einer Mobilisierung des RRE-defizienten und des SIN-Vektors. Beide Ansätze reduzieren die Mobilisierung unabhängig voneinander um mindestens 10⁴. RRE-defiziente lentivirale Vektoren sind ein neuer Ansatz zur Reduktion des Mobilisierungsrisikos.

HIV based vectors harbour the risk of vector mobilization by HIV. Infection of lentiviral transduced cells by HIV could lead to packaging of vector RNA into HIV particles and transfer of the vector. The unspliced vector RNA needs to be transported in a Rev-RRE dependent manner into the cytoplasm. Deletion of the RRE should reduce the risk of mobilization. RRE was replaced by an MS2 stem loop, an RNA secondary structure to which the coat protein of the phage MS2 can bind. Cotransfection of the RRE-deficient, MS2 containing vector with an MS2-Rev expression plasmid allowed vector production at titers exceeding 5x10⁵ infectious units/ml. After infection of transduced cells by HIV-1 and transient transfection of packaging plasmids, mobilization of the RRE deficient and a SIN vector remained undetectable indicating that both approaches independantly reduce mobilization. Thus, RRE-deficient lentiviral vectors provide a novel approach to reduce the risk of mobilization.