Brandt, Sabine

Einfluss regulatorischer RNA-Sequenzen des Affenimmundefizienzvirus auf die Infektiösität lentiviraler Vektoren

Der komplexe Replikationszyklus der Lentiviren wird unter anderem durch cis-aktive RNA-Sequenzen reguliert. In dieser Arbeit wurden die Funktionen der R-Region und des rev responsive elements (RRE) genauer charakterisiert.

Obwohl die Sequenz der R-Region zwischen den Lentiviren stark variiert, sind deren Funktionen hoch konserviert. Aus diesem Grund wurde die R-Region verkürzt oder durch heterologe Sequenzen ersetzt und der Einfluss auf den Vektortiter, die Genomverpackung und die Stabilität der Transkripte im Zytoplasma untersucht.

Das RRE fungiert als Bindestelle für das Rev-Protein und vermittelt dadurch den Transport ungespleißter lentiviraler Transkripte in das Zytoplasma.
In dieser Arbeit konnte jedoch gezeigt werden, dass auch ohne Rev/RRE-Interaktion ungespleißte SIV-Vektortranskripte in das Zytoplasma gelangen. Darüber hinaus wurde in diesem System erstmals ein Einfluss auf die Genomverpackung beobachtet, der eine Reduktion des Vektortiters nach sich zieht.

The complex life cycle of lentiviruses is in part regulated by cis-acting RNA sequences. In this work the functions of the R region and the rev responsive element (RRE) were characterised.
Although the sequence of the R region varies among different lentiviruses their functions are highly conserved. Therefore the R region was shortened or replaced by heterologous sequences and the influence on vector titre, genome packaging and transcript stability in cytoplasm was analysed.

The RRE acts as binding site for the Rev protein and thereby mediates the nucleus to cytoplasm transport of unspliced lentiviral transcripts.
However, in this work a Rev/RRE independent RNA-transport could be observed. Furthermore there was an influence of Rev/RRE on genome packaging, resulting in titre reduction.